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回答1
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张艳凯 副主任医师
开封市中心医院
三级甲等
全科
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嘌呤霉素是一种常用的抗生素,在分子生物学和细胞生物学实验中,常被用于筛选转染了特定基因的细胞。其筛选浓度的确定至关重要,合适的浓度能有效筛选出阳性克隆,浓度不当则可能导致筛选失败。 嘌呤霉素的筛选浓度会受到多种因素的影响。首先是细胞类型,不同的细胞对嘌呤霉素的敏感性差异较大。例如,一些肿瘤细胞系可能相对耐受嘌呤霉素,需要较高的浓度才能达到筛选效果;而正常细胞系可能对其更为敏感,较低浓度就可发挥作用。 一般来说,在进行筛选之前,需要进行预实验来确定最佳的筛选浓度。预实验时,将细胞接种于多个培养孔中,分别加入不同浓度梯度的嘌呤霉素,如0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml等,培养一段时间后观察细胞的生长和死亡情况。通常以在一定时间内(如7 - 10天)能使未转染细胞全部死亡,而转染细胞能存活的最低浓度作为筛选浓度。 在常见的细胞系中,哺乳动物细胞的嘌呤霉素筛选浓度一般在1 - 10μg/ml之间。但这只是一个大致范围,具体还需根据实际情况进行调整。确定合适的筛选浓度后,在后续的筛选过程中要严格按照该浓度添加嘌呤霉素,以保证筛选结果的准确性和可靠性。
2025-09-28 06:36
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