诊断青春发育延迟与性幼稚的诊断步骤与检查内容与性早熟相类似。病史、体格检查、影像学检查及骨龄的估价在青春延迟与性幼稚的诊断中同样很重要。此外，垂体促性腺激素、泌乳素、雌二醇的测定是鉴别病因是在性腺还是在垂体及下丘脑是不可缺少的。高促性腺激素性性腺功能低下可通过测定血FSH、LH的水平较容易地进行诊断。女孩年龄已过13岁而无性征发育或性征开始出现后5年仍无月经来潮，应进行FSH、LH及E2测定。若FSH及LH水平升高，则表明病因在性腺。核型的检查对高促性腺激素性性腺功能低下的女孩也是十分必要的。与青春延迟有关的其他中枢神经系统肿瘤还有松果体瘤，异位松果体瘤，生殖细胞瘤及泌乳素瘤等，多数可较早做出诊断。鉴别低促性腺激素性性腺功能低下与体质性青春延迟的鉴别诊断有时比较困难。详细的病史、生长发育史、出生史、头部创伤史等以判断青春延迟是否与先天异常、围生期事件及营养不良等有关。体格检查首先应测量身高体重并计算其与同龄人平均值的标准差，检查性征发育情况并确定其发育的期别。体格检查还要注意排除心、肺、肾及胃肠疾患。当上述检查仍不能确诊时，有时一段时间的随诊观察也是很必要的，以确定是否有第二性征自发出现或发展。一般18岁后仍未出现性成熟的第一个特征，且促性腺激素与性激素的水平亦无增加，而血DHAS水平已达相应年龄，常常提示孤立性促性腺激素缺乏的诊断。