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回答1
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杨建勇 主任医师
中山大学附属第一医院
三级甲等
放射介入专科
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流式细胞仪是一种用于对细胞进行快速、多参数定量分析和分选的技术。利用流式细胞仪检测细胞增殖可按以下步骤进行。 首先是样本制备。从组织或细胞培养物中获取细胞,将其制成单细胞悬液,确保细胞分散良好,避免细胞团块影响检测结果。同时,根据实验目的选择合适的染料对细胞进行标记。常用的标记方法有以下几种,一是通过核酸染料标记法,利用能与DNA结合的荧光染料,如碘化丙啶(PI)等,不同增殖阶段的细胞DNA含量不同,通过检测荧光强度来分析细胞周期分布,从而了解细胞增殖情况;二是使用细胞增殖相关抗原标记法,如Ki-67抗原,它在增殖细胞中表达,不表达于静止期细胞,用荧光标记的抗体与Ki-67结合,流式细胞仪检测荧光信号即可区分增殖和非增殖细胞;三是采用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记法,CFSE能进入细胞并与细胞内的蛋白质结合,细胞每分裂一次,其荧光强度就会减半,通过检测荧光强度的变化来分析细胞增殖代数。 然后进行流式细胞仪检测。将标记好的细胞悬液注入流式细胞仪,仪器会使细胞排成单列通过检测区域,激光束照射细胞,激发荧光染料发出荧光,同时检测前向散射光、侧向散射光以及荧光信号。最后是数据分析。使用专门的软件对检测得到的数据进行分析,根据不同的标记方法和实验目的,绘制细胞周期分布直方图、细胞增殖曲线等,计算细胞增殖指数等相关参数,从而评估细胞的增殖情况。
2025-09-15 10:22
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