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睾丸生精细胞的体外成熟

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  与卵细胞体外成熟一样,生精细胞的体外成熟则是解决男方无法获得成熟精子的有效方法,但其成功的报道很少。

  精子发生是一个十分复杂的过程,可分为3个阶段:精原细胞有丝分裂阶段、精母细胞减数分裂阶段和精子细胞变形阶段;精子生成包括连续的有丝分裂、减数分裂和减数分裂后成熟过程。生精细胞体外成熟已成为治疗男性不育的一种方法。

  培养方法:

  1、组织(或器官)培养:取部分睾丸组织或曲细精管片段进行培养而不作任何的细胞分离处理,这是最早采用的培养方法,现在一般会将睾丸曲细精管进行简单的物理分离或酶消化处理,得到非常细小的小管碎片,且不过多破坏睾丸中生精细胞与各种睾丸体细胞之间固有的联系,然后进行培养。

  2、细胞培养: 细胞培养是生精细胞培养的发展方向,但生精细胞单独培养仅能存活2~3d.因此一般采用生精细胞-Sertoli细胞共培养(coculture)的方法:首先分别分离睾丸生精细胞和Sertoli细胞,然后进行共培养,使这些细胞之间在培养过程重新建立联系。

  3、培养系统:基础培养液一般采用DMEM/F12培养液,添加一些生长因子和激素(卵泡刺激素和睾酮);培养温度一般选择32~24℃,95%空气和5%CO2。

  难点

  目前的方法可使细线期精母细胞经减数分裂分化为精子细胞,但这只是整个精子发生过程的一部分,精原细胞还无法分化为初级精母细胞;精子细胞无法完全在体外成熟为精子。

  临床应用

  虽然生精细胞培养还没有取得令人满意的结果,但生精细胞的体外成熟技术已经应用于临床上。1999年,Tesarik等培养了5例睾丸精子发生停留于初级精母细胞阶段病人的睾丸生精细胞,结果2例最终得到了精子细胞,将其通过显微注射法注入其配偶的卵子,结果2例均受精成功,其中1例在36周后生育1对双胞胎,且发育正常。另外对1例不育患者的睾丸精子细胞在体外培养24小时,然后进行ICSI,结果使其妻子生育了1对双胞胎。

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